军团菌（Legionella），革兰氏阴性杆菌，目前发现有19种能引发人类感染肺炎，以嗜肺军团菌最易致病。军团菌营养要求特殊，需氧，2.5~5.0%CO2能促进生长，最适生长温度为35℃，生长缓慢，3天后才可见1~2mm细小圆形菌落。

根据GB/T 40392-2021《循环冷却水中军团菌的检测》，需要将军团菌样品接种GVPC琼脂后，于2.5%CO2，36℃±1℃，相对湿度≥95%的环境下培养10天，并在第3天开始检查培养皿，在培养期结束时，按典型的军团菌菌落形态记录可疑军团菌菌落数。典型军团菌菌落呈白色、灰色、蓝色或紫色，表面光滑的菌落形态，或在紫外光照射下，产生荧光的菌落，可疑菌落在接种BCYE和BCYE-Cys培养基上进行验证。

问题一 /培养

整个检验流程中，形成军团菌的典型菌落对于检验结果是至关重要的环节，然而虽然军团菌在自然环境下抵抗力很强，但脱离最适培养环境却极易出现不形成典型菌落形态的现象。

鉴于军团菌对于CO2气体环境的依赖性，建议样品制备过程也在2.5%CO2环境中进行，以避免空气状态下的低CO2环境对于军团菌产生的应激代偿性改变。

- 控气工作站 -

使用Punmicro的控气工作站，可实现操作与培养环境严格稳定在军团菌的最适环境。

▲自动反馈调节的气体控制系统可确保内腔CO2稳定在2.5%±0.1%的水平；▲内腔定向气道强制对流可确保内腔CO2浓度的均一性，同时也可确保内腔温度均匀稳定在36℃±0.5℃；▲自动转移闸可在样品转移过程中进行气体环境的预制备，避免外界低CO2空气对于内腔气体环境的破坏，保证样品培养处于连续稳定的状态；▲配备内置HEPA过滤器、进气端HEPA过滤器和内置紫外线灯，可保证内腔的洁净状态，增加对操作人员的生物安全保护。

问题二 /数菌

整个检验流程中，识别典型军团菌菌落是一项具有一定难度的工作，在可见光下，军团菌的菌落颜色呈现多变性，包括：白色、灰色、蓝色、紫色，甚至还可能是棕色、灰绿色与深红色，尤其是在1~2mm的细小菌落状态下识别，对于检验人员形成挑战，也是结果偏差重要来源。

GB/T 40392-2021也提供了通过紫外灯照射进行荧光菌落的识别方法，但紫外光对于活菌存在杀伤力，只允许几秒的照射时间，但在复杂的菌落中，肉眼识别1~2mm细小菌落的荧光，并且准确记录荧光菌落数，仅仅几秒的极短时间也很难完成。

- 自动菌落计数 -

使用Punmicro的ICON自动菌落计数仪，可自动、快速地进行荧光菌落的识别与计数。

▲配备自动样品仓门，采用全黑环境检测，可精确获取细小菌落的微弱荧光信号；▲低功率紫外灯作为荧光激发源，显著降低紫外光对于活菌的杀伤作用，有效保护菌株活性；▲AI 人工智能技术，可对于复杂菌落形态进行准确别与判断，并在10秒内完成全皿分析，无需剪切培养皿边缘，避免强制负偏差的产生；▲全面的图片与报表的数据生成功能，可定制检测单位专用格式的检测报告。