如何应对军团菌的检验|Punmicro从培养到计数带给你极致体验
军团菌(Legionella),革兰氏阴性杆菌,目前发现有19种能引发人类感染肺炎,以嗜肺军团菌最易致病。军团菌营养要求特殊,需氧,2.5~5.0%CO2能促进生长,最适生长温度为35℃,生长缓慢,3天后才可见1~2mm细小圆形菌落。
根据GB/T 40392-2021《循环冷却水中军团菌的检测》,需要将军团菌样品接种GVPC琼脂后,于2.5%CO2,36℃±1℃,相对湿度≥95%的环境下培养10天,并在第3天开始检查培养皿,在培养期结束时,按典型的军团菌菌落形态记录可疑军团菌菌落数。典型军团菌菌落呈白色、灰色、蓝色或紫色,表面光滑的菌落形态,或在紫外光照射下,产生荧光的菌落,可疑菌落在接种BCYE和BCYE-Cys培养基上进行验证。
问题一 /培养
整个检验流程中,形成军团菌的典型菌落对于检验结果是至关重要的环节,然而虽然军团菌在自然环境下抵抗力很强,但脱离最适培养环境却极易出现不形成典型菌落形态的现象。
鉴于军团菌对于CO2气体环境的依赖性,建议样品制备过程也在2.5%CO2环境中进行,以避免空气状态下的低CO2环境对于军团菌产生的应激代偿性改变。
- 控气工作站 -
使用Punmicro的控气工作站,可实现操作与培养环境严格稳定在军团菌的最适环境。
▲自动反馈调节的气体控制系统可确保内腔CO2稳定在2.5%±0.1%的水平;▲内腔定向气道强制对流可确保内腔CO2浓度的均一性,同时也可确保内腔温度均匀稳定在36℃±0.5℃;▲自动转移闸可在样品转移过程中进行气体环境的预制备,避免外界低CO2空气对于内腔气体环境的破坏,保证样品培养处于连续稳定的状态;▲配备内置HEPA过滤器、进气端HEPA过滤器和内置紫外线灯,可保证内腔的洁净状态,增加对操作人员的生物安全保护。
问题二 /数菌
整个检验流程中,识别典型军团菌菌落是一项具有一定难度的工作,在可见光下,军团菌的菌落颜色呈现多变性,包括:白色、灰色、蓝色、紫色,甚至还可能是棕色、灰绿色与深红色,尤其是在1~2mm的细小菌落状态下识别,对于检验人员形成挑战,也是结果偏差重要来源。
GB/T 40392-2021也提供了通过紫外灯照射进行荧光菌落的识别方法,但紫外光对于活菌存在杀伤力,只允许几秒的照射时间,但在复杂的菌落中,肉眼识别1~2mm细小菌落的荧光,并且准确记录荧光菌落数,仅仅几秒的极短时间也很难完成。
- 自动菌落计数 -
使用Punmicro的ICON自动菌落计数仪,可自动、快速地进行荧光菌落的识别与计数。
▲配备自动样品仓门,采用全黑环境检测,可精确获取细小菌落的微弱荧光信号;▲低功率紫外灯作为荧光激发源,显著降低紫外光对于活菌的杀伤作用,有效保护菌株活性;▲AI 人工智能技术,可对于复杂菌落形态进行准确别与判断,并在10秒内完成全皿分析,无需剪切培养皿边缘,避免强制负偏差的产生;▲全面的图片与报表的数据生成功能,可定制检测单位专用格式的检测报告。