时间:2024-05-09 浏览次数:15
微生物的分离与纯化是微生物学中一项基础而重要的技术,它涉及从混合微生物群落中分离出目标微生物,并将其纯化到足够纯度的程度,这一过程为微生物学研究提供了基础,并在许多领域中具有广泛的应用。
微生物分离、纯化、保存
目的
获得单一菌株:通过分离和纯化,可以获得单一的微生物菌株,便于进行研究和应用。
研究微生物特性:将微生物分离出来后,可以更准确地研究其生长、生理、代谢途径、抗性等方面的特性。
提取生物活性物质:某些微生物产生的生物活性物质对医药、农业、工业等领域具有重要的应用价值,而通过分离和纯化可以提高生物活性物质的纯度和产量。
保存微生物资源:对微生物进行保存,可以避免遗失或者混合,确保微生物资源的完整性和持久性。
因此,对微生物进行分离、纯化和保存,有利于深入研究微生物特性,并应用于各个领域具有不可替代的重要意义。
难题
在微生物菌株的筛选与挑选过程中,传统的手动挑选菌落以及文库克隆/复制方法,不仅消耗人力,而且耗时较长,此外,还要避免挑菌过程中微生物污染,并且要提供合适的微生物生存环境,然而,实验室空间有限,如何在实现自动化流程的同时满足厌氧环境需求,成为了一项棘手难题。
解决方案 /
挑菌
在进行适当时间的培养后,稀释的样品在琼脂表面形成随机生长的菌落,通过PIXL菌落高通量挑选工作站,我们可以获得单菌落,并将其接种至孔板以进行扩大培养,还可以根据菌落的大小、荧光强度、颜色深浅、圆度、临近度等特征进行筛选。
PIXL菌落高通量挑选工作站兼容SBS规格矩形平皿、90mm或150mm圆形平皿、96和384密度的普通多孔板、96和384密度的深孔板等来源板。而目标板则包括SBS规格矩形平皿、96和384密度的普通多孔板、PCR板、深孔板、MALDI TOF板,可同时使用4种不同类型或同种类型的目标板。
PIXL菌落高通量挑选工作站采用Pickup Line无菌挑菌线挑菌,一根Pickup Line可持续挑菌45小时,无需更换,特别值得一提的是,由于没有清洗过程降速,挑菌速度可达到1000个/小时。
解决方案 /
纯化
通过B.sight单细胞分选仪,我们能获得纯化的微生物细胞,这些单细胞经过培养后,可储存入库,或用于后续实验,如多糖生化鉴定、PCR扩增及测序、MALDI-TOF微生物鉴定等。
B.sight单细胞分离技术运用可见光相差超显微视野视频识别技术,将混合菌液中的微生物单细胞逐一分离,并滴入目标板中。支持向SBS96孔板、SBS384孔板以及琼脂培养皿中分选单细胞,具有超快分选速度,仅需5分钟即可完成96孔板的单细胞分选。此外,该技术还可配合荧光识别模块,实现标记菌株克隆指向性分选,并可配备厌氧外罩,以实现厌氧菌分选。
解决方案 /
保存
菌种库应每年进行一次活化处理,在传代培养过程中,可采用高通量菌落筛选工作站ROTOR+阵列接种方法,将保存在孔板中的菌株高效地接种到琼脂表面进行复苏活化,活化后的菌株经过培养,再利用ROTOR+高通量接种技术将其接种到液体孔板中,最后进行离心浓缩和冷冻保存。
微生物在培养和传代过程中,因各种因素易受到污染、发生变异甚至死亡,从而导致菌种品质的下降。因此,菌种保藏工作的核心目标在于确保菌株的稳定存活,防止其丢失,避免受到外源杂菌的污染,以及最小化或消除变异的可能性。这样,我们才能保持菌种原有的活性及其独特的生物学特征。
对于厌氧/微需氧微生物,暴露于有氧环境会对其群体活性产生显著的不利影响,在分离、纯化和保存过程中,利用厌氧外罩保护设备,能够始终保持厌氧或微需氧条件,从而确保微生物活性得到有效维护。