在食品微生物学检验菌落总数测定中，由于定量的对象是肉眼不可见的微米级微生物生命体，菌落总数测定结果一直存在着一定的不确定性，纵观检验全部流程，其中稀释的准确性、菌落识别的准确性以及无菌控制这几个方面是产生误差，进而引起结果不确定性的关键环节。

为了提升菌落总数测定结果的准确性，《食品微生物学检验 菌落总数测定》GB4789.2从2016版到2022版着重加强这几个方面的控制。
● 在液体样品制备环节，增加了使用拍击式均质器制备1:10样品匀液的实验步骤；
● 在样品稀释环节，将吸管反复吹打混匀方式改为振荡器振荡混匀方式；
● 在菌落检测环节，增加了菌落总数测试片的检测方法；

稀释的准确性

稀释是菌落总数测定的重要环节，若因混匀程度不达到100%，则间接产生稀释误差，并且误差随稀释倍数的增加而呈几何级数增长。

拍击式样品稀释方式是被验证能够达到良好的混匀度的实验方式，所以2022版新国标将液体样品的稀释也要求采取拍击式混匀操作；拍击式混匀操作，可以有效地通过施加外界机械力而促进样品与稀释液之间的振动，从而达到快速而彻底的混匀，有效地避免或减少因未能充分混匀而产生的稀释误差。

瑞士iNLABTEC Serial UC连续梯度稀释仪，采用拍击式混匀方式，自动拍击器可加强稀释样液的振动，仅需4秒即可达到100%的混匀度。

● 无需吸管吹打操作，符合GB4789.2-2022新国标的要求；

● 4秒拍击式混匀方式，实现混匀的充分性与高效性；

● 使用无菌Tip头、无菌稀释袋、无菌开袋器，完全符合无菌控制要求。

菌落识别的准确性

琼脂上的菌落是由肉眼不可见的细菌细胞或细胞团块，经培养后，分裂繁殖形成的肉眼可见的细菌团块。因为细菌各类不同而菌落形态差异很大，故菌落识别至今尚未形成标准化的判定。

为了保证样品中的细菌不受局限生长空间的拮抗作用影响，而采取倾注法制备样品平皿。但菌落生长于琼脂中，就增加了菌落识别的复杂度。如菌落粘连、菌落重叠、琼脂气泡等。

2022版新国标新增了菌落总数测试片的检测方法，菌落总数测试片只需识别菌落产生的色斑即可判定菌落，有效地降低了琼脂识别菌落的难度，亦为减少菌落识别误差的解决方法，但菌落测试纸片上能够形成显色菌斑的细菌，只满足能够在测试纸片的培养基上生长，且能够产生与底物的显色反应的细菌，目前尚无更全面的验证数据，故整篇标准中关于测试纸片法只在6.2.2中一句带过，并无详尽指导与解释。

Punmicro ICON全自动菌落计数仪创新引入人工智能技术，对于复杂的倾注法样品平皿上的菌落具有客观而精确的识别能力，可有效提升菌落计数结果的准确性。

● AI人工算法技术，可自主学习菌落判定规则，结合高分辨成像系统，可达到甚至超越人工计数水平，解决重叠菌落、粘连菌落、异形菌落等复杂菌落识别判定问题；

● 全皿计数，有效区分培养皿边缘折光与反光，解决边缘菌落自动识别计数问题；

● 一键计数，无需人工根据样品状况进行大量的参数设定，样品直接计数，解决全自动菌落计数仪的实用性问题；

● 可进行菌落测试纸片分析，在高分辨成像系统的加持下，解决人工肉眼不易辨识的重合菌斑的识别；

● 可进行图片与数据的全面记录，并可定制数据统计运算与检测报表格式。

无菌控制

无菌控制对于菌落总数测定是一项基础而重要的要求，避免外源性污染与交叉污染直接关系到检测数据的准确性。

2022版新国标关注到10倍系列稀释的操作过程中，使用吸管反复吹打来实现混匀的操作存在着极大的外源污染的风险，故改用振荡器进行振荡混匀。

但振荡器对于稀释体系的振动幅度远不如反复吹打，若想达到100%混匀程度，唯一的方法就是延长振荡时间，这种方式将显著降低实验操作的速度。